本发明公开一种A群轮状病毒核酸检测标准物质及其制备方法和应用。本发明A群轮状病毒核酸检测标准物质的RNA序列如SEQ ID No.1所示。本发明还具体公开了所述A群轮状病毒核酸检测标准物质的制备方法以及在A群轮状病毒核酸检测中作为标准物质的应用。本发明A群轮状病毒核酸检测标准物质无生物传染性,容易制备,具有良好的均匀性和足够的稳定性,且该标准物质具有准确、可溯源的特性值;既可作为A群轮状病毒核酸定性检测的阳性对照,又可以作为A群轮状病毒核酸定量检测的外部标准品,还可用于评价新的A群轮状病毒核酸检测方法,为A群轮状病毒核酸检测能力认证认可提供物质基础,可被广泛应用于各实验室。